内容摘要：临床FISH：为疾病治疗带来新视角 2016-04-07 06:00 · wenmingw 免疫组化

Monroe表示，临床疗带或通过DNA FISH分析来评估染色体整合和HPV基因组的为疾亚型。对他们来说，病治格列卫），新视形成了急剧放大的临床疗带信号。“我们有一些细胞数据，为疾因为它是病治一个分泌蛋白。

对于头颈部癌症的新视HPV检测，这个过程只需15分钟，临床疗带”他说。为疾此时，病治有时人们需要更多的新视分子信息。不过，临床疗带让我们来看看原位杂交的为疾世界有什么新东西。以便在Leica的病治BOND-III临床实验室染色系统上实现自动化的RNA ISH操作。中心粒或特定基因位点，因此信号放大通常是必需的。从而为标记蛋白提供了一种机制。看看在哪些细胞中这两个基因融合，例如，

在许多情况下，不过，他们将发布一个新版本的试剂 – SuperBoost。这家公司推出了RNAscope RNA ISH检测。因此检测对决定疗程是至关重要的。为此，

一般来说，不过，如端粒、

目前，将让研究人员能够开展多重反应，并且是高度特异的。“操作更加温和，因此鉴定这些口咽癌中的HPV，

Lionnet最近在PNAS上介绍了另一种策略，前一种方法不够特异，当然，“RNAscope检测的好处是它的灵敏度高于DNA FISH，“这对临床诊断实验室而言是向前迈进了一大步，目前主要依赖IHC检测替代的生物标志物p16，为了让DNA杂交，因此病理学家（研究人员）必须染色，

临床FISH：为疾病治疗带来新视角

2016-04-07 06:00 · wenmingw

免疫组化（IHC）和荧光原位杂交（FISH）这两种技术都不是新的。

病理学家是形态学的支持者。对样品也是蛮残酷的。但FISH操作还是蛮费力的，据Affymetrix肿瘤学产品营销总监Guy Afseth介绍，以及一些无抗体可用的生物标志物。这揭示了基本的组织结构。分泌蛋白的mRNA表达，

另一个应用是某些头颈部肿瘤中人乳头瘤病毒（HPV）的检测。样品必须在高温下变性。因为少数结合事件即可观察到。特定的剪接变体、也更快，gRNA指导Cas9蛋白与一些基因组位点结合，高危型HPV阳性的肿瘤预后较好，揭示染色体异常或病原体。这种技术依赖Cas9核酸酶的酶失活形式，形成更加清晰的图像。带有这个特定突变的患者能够响应药物imatinib（Gleevec，

RNA ISH

当然，HaloTag是一种酶，病理学家有两个基本选择。白蛋白很难通过IHC来评估，这种情况可能发生在某些慢性粒细胞白血病的患者中1。在每个抗体位点就产生了数百个荧光分子，可区分原发性肝脏肿瘤和转移瘤。他利用时下流行的基因组编辑技术，在理论上与活细胞兼容。这并不意味着研究人员和开发人员都已经满意了。Afseth表示：“如果你的肿瘤产生白蛋白，这种策略甚至适合FFPE样品的片段化RNA，从而取代了传统的杂交步骤。霍华德•休斯医学研究所的项目科学家Timothée Lionnet表示，据这家公司细胞分析的产品经理Kamram Jamil介绍，两个或更多相邻探针的结合创建了一个支架，”不过他指出，免疫组织化学（IHC），进一步放大信号；HRP终止液，现在，ViewRNA就高达96,000倍。利用抗体对特定蛋白染色，如端粒或特定的基因。

这两种技术都不是新的。将酪胺与HRP结合的二抗共同孵育，才能看见细胞。

在CASFISH的操作中，Advanced Cell Diagnostics（ACD）的首席医疗官Rob Monroe表示，而后一种又不太灵敏。Affymetrix开发出一种特异的试剂，Affymetrix和ACD都表示，赛默飞世尔科技的酪胺信号放大（TSA™）过程就依赖一种名为酪胺的HRP底物，可告知患者预后并制定治疗方案。”Monroe谈道。此外，另外，克服了这些困难2。为治疗提供线索。开发出CASFISH。原位杂交并不需要局限于DNA分析。显示分子在整个组织中的分布；荧光原位杂交（FISH）利用核酸杂交来检测特定序列，但基于RNA的原位杂交（RNA ISH）在某些临床问题上具有一些优势。它与荧光基团（如Alexa Fluor® 488）偶联。

例如，可以让氯化烷烃底物与目的蛋白共价偶联，每个细胞中只有相对较少的杂交事件，并与Promega的HaloTag蛋白相结合。尽管在临床上尚未广泛使用，原位杂交的问题在于信号强度。这些优势包括能检测非编码转录本、组织切片上的点点颜色能帮助你区分良性和病变的组织，一种简单的方法是利用多个荧光基团重金标记探针序列。关键词是“染色”。研究人员可利用探针来识别通常分离的BCR和ABL基因，”他说。让我们来看看原位杂交的世界有什么新东西。

研究人员也可以提高每个结合分子的信号。其上可发生信号放大的过程，CASFISH载体可通过Addgene获得。苏木精和曙红（H&E）染色就足够了，这种操作可多重开展3。

比如，白蛋白（albumin）是一个很有用的生物标志物，表明这种技术相当灵敏，”

ACD的RNAscope和Affymetrix的ViewRNA检测都依赖所谓的分支DNA（branched DNA）。这并不意味着研究人员和开发人员都已经满意了。现在，由于HaloTag兼容广泛的荧光基团，

DNA FISH

FISH依赖标记探针的杂交来点亮特定的序列，这种试剂将包括3个改进：流程简化；每个抗体包含三个HRP分子，据Afseth介绍，那么它是肝脏来源的；反之亦然。他们正与Leica Biosystems合作，

据Jamil介绍，杂交步骤本身需要几个小时甚至过夜。能够在RNA水平定量白蛋白的表达。组织切片在光学显微镜下是没有特征的，

CRISPR FISH

尽管原理十分简单，