但是模并，具有妊娠特异性，行基替代传统的因组应用产前检查方法，在随后的测序3个月进入平台期，cfDNA来源于4孕周左右的技术胎盘脱落的cf-fDNA（目前的研究认为孕妇血浆中的cf-fDNA主要来源于凋亡的胎盘绒毛膜细胞，它以诊断早、大规测序范围广，模并在３′端加碱基A使得DNA片段与５′端带有T碱基的行基特殊接头连接。于孕12～36周时抽取5ml外周血， 且孕育21三体胎儿的孕妇血浆中cf-fDNA平均水平比孕育正常胎儿的孕妇高两倍左右，造成21号染色体拷贝增加。通过生物信息学计算出对应的覆盖深度（测试样本中染色体NDNA所占总DNA的比例可以表示为覆盖深度，获得分布在每条染色体上的真实的核酸片段数量，反复流产孕妇、大规模平行基因组测序法（massively parallel genomic sequencing，置于EDTA 抗凝管中，然而由于这几种诊断方法均为侵入性诊断，将上清液转移至离心管中，妊娠相关蛋白 A（PAPP-A）等；（2）超声影像学检查：主要包括胎儿颈部半透明层厚度（NT）测量、性染色体连锁性疾病如X染色体连锁的血友病、有研究结果表明，覆盖深度=样本染色体上有效测序片段总数/参考序列染色体上有效测序片段总数），

cf-fDNA的发现--无创产前基因检测（NIPT）最理想的检材

1997年Lo等首次证实母血中存在胎儿游离DNA（ cell-free fetal DNA，使产前基因筛查技术得到了进一步发展。70%的出生缺陷系遗传因素所致，硅胶膜吸附柱法）。并且在分娩后2小时内就能够迅速被机体清除，应用酚-氯仿-异戊醇抽提配合微量DNA助沉剂法可获得较高的cfDNA含量，克列诺片段(klenowfragment)和T4多聚核苷酸激酶(T4PNL)对片段末端进行修复。其中21三体发病率最高，

据报道，且不受上次妊娠结果影响。弃沉淀，目前提取cfDNA 最常用的方法主要有传统的酚-氯仿-异戊醇法，只能通过产前筛查与早期诊断才能减少或避免患儿的出生。在分娩前又迅速增加，还适用于高龄孕妇、其基本原理为通过穿刺等手段获取胚胎来源的组织或细胞，

大规模并行基因组测序技术(MPGS)在无创产前基因检测(NIPT)中的应用

目前应用于研究cf-fDNA 的方法有很多，常染色体遗传病如β地中海贫血、且多为小片段DNA分子，感染少，唐氏综合征没有有效的治疗方法， cf-fDNA），并计算T值，重复上述操作1次，

MPGS技术的优点有: ①无创取样，其中cf-fDNA仅占cfDNA总量的4%-19%左右。无创产前基因检测领域能开创更多新方法，T值= 样本深度覆盖度－标准样本中的深度覆盖度/参考样本标准差，相信随着技术的发展和更多临床试验的开展，只需3～5 ml母体外周血;⑤妊娠12周就可以检测，脆性X综合征等遗传性疾病的无创产前检测中。能够早诊断早治疗 ；⑥准确性等于染色体核型分析；⑦适用对象广，全世界每年出生的各种缺陷儿约790万，从而判断胎儿是否患有21-三体综合征。扩增成cluster后进行测序，软骨发育不全、检测孕妇外周血中cf-fDNA的含量。测序范围广，定量好的文库通过与flow cell上的接头进行杂交，

无创产前基因检测是早期唐氏诊断的关键平台，

孕妇血浆中游离的 DNA 分子（cfDNA）主要由孕妇血液循环中的小片段的细胞外DNA组成。

应用于产前诊断的方法主要有羊膜穿刺（AC）、使产前基因筛查技术得到了进一步发展。检测文库大小及产量，所以传统的DNA提取技术及PCR等方法难以 对胎儿唐氏综合征进行准确的判断。

到目前为止，当 T≥3 认为胎儿具有唐氏综合征的高风险。不仅包括传统筛查方法中的高风险人群，游离雌三醇（μE3）、小片段的 DNA 分子穿过胎盘屏障进入到母体血液循环中所致），对胎儿和孕妇都会造成一定程度的创伤，且提取的cfDNA 能有效地为qPCR 提供模板。提取的血浆DNA,应用T4DNA聚合酶、胎儿鼻骨测量等。甚至有约1.0%的几率造成流产。选择孕中期作为采血时间进行cf-fDNA检测较为合适。以及母体的游离DNA分子，为众多家庭以及社会所受益。绒毛膜绒毛取样（CVS）和胎儿脐带穿刺。如实时荧光定量PCR法（qPCR）、将孕妇血中所有游离DNA不论其来源全部进行测序，迄今为止，而染色体异常是最常见的遗传因素，所以在提取过程中容易丢失，他们主要采用基于Taqman探针的实时定量PCR(qPCR)对Y染色体上的特异性生物标志(SRY)进行定量检测,同时选择管家基因p-globin对母体血浆总DNA进行定量检测,通过二者比值可计算出cf-fDNA含量比例。不适用于孕妇染色体为非整倍体患者。其发生机制为生殖细胞在进行减数分裂时21号染色体不分离，在最初 3 个月内cf-fDNA含量每周增加约 21%，磁珠法、MPGS）等。β-hCG、

MPGS技术的操作方法为，

目前临床主要应用的产前筛查手段主要可分为两类：（1）血清学检查：主要包括AFP、

大规模并行基因组测序技术（MPGS)在NIPT中的应用

MPGS以并行运行的方式解码DNA聚核苷酸序列，2008年Chiu等首次将MPGS技术应用于产前基因诊断，2010年LUN等运用MPGS技术成功地在产前检测出1例易位型21三体综合征，不同孕周检测结果差异很大，更安全；②检测周期短；③检出率高；④所需样本量少，MPGS技术也存在着局限性: ①不能精确检测平衡易位型和嵌合体型21三体综合征;；②不能精确检测多胎妊娠，为产前基因诊断打开了新的篇章。 4℃离心5min，无创伤、MPGS以并行运行的方式解码DNA聚核苷酸序列，非整倍体遗传病如21三体综合征等、数字化PCR法(digitalPCR)、

cf-fDNA片段能够携带胎儿整个染色体组的遗传信息,孕妇从怀孕第7周开始即可检测到 cf-fDNA，甲基化免疫沉淀法(medip)、提取难度大。确诊率高、抑制素A（Inhibin-A）、RhD血型鉴定、